分子量排阻層析（SEC）又稱凝膠過濾層析，它根據分子量大小來分離分子。凝膠基質由特定大小孔隙的球形 小珠組成，不同分子量的分子從孔中排阻通過，發生分離。小分子進入孔內，會延滯它們通過層析柱，而大分子避 開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據分子量大小進行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。

依據層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質。分子量排阻層析中一種常規的方法為基團分離，包括：

脫鹽— 目標分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內。為了獲得理想的分離，基質的分子量排阻限度應比目 標分子小。

分級分離— 一定分子量范圍的分子在凝膠基質內分離。使用這種方法時，目標分子應當在凝膠的分級分離范 圍以內。

分子量排阻層析常規應用包括蛋白分級分離及分子量確定、核酸分離、質粒純化和多糖分級分離。

層析分辨率取決于顆粒大小、孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2–10 cm/hr）、細長 柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1–5%）、2 倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得zui高分辨率。 如果用于脫鹽，樣品體積則可達到總床體積的30–40%，并可使用短粗柱。

關于抗體純化應用指南，請索取資料# 1802。蛋白應用指南請索取資料# 1801。

瓶裝分子量排阻層析介質

Bio–Gel P 聚丙烯酰胺微球體由丙烯酰胺和N,N"– 甲叉雙丙烯 酰胺共聚而成，用于高分辨率的凝膠過濾。Bio–Gel P 凝膠具有以 下特點：

• 可分離不同大小的分子，分子量范圍從100至100,000
• 本質上雖是非離子，但極度親水
• 為敏感化合物提供有效而溫和的凝膠過濾
• 特殊的合成組份，不象右旋糖苷和瓊脂糖易滋生微生物或過濾碳水化合物
• 在室溫、pH 2–10條件下操作，可高壓滅菌（pH 5.5–6.5）。流速和分辨率隨著溫度的遞增（4–80°C）而增加

Bio–Gel P凝膠可與弱有機酸、8M尿素、離液劑、去垢劑和易混有機溶劑兼容。酒精（zui高20% v/v）可以提高 核苷酸、多肽和丹寧酸的溶解度，而不改變凝膠的排阻特性。同樣可以使用甲酰胺溶劑，Bio–Gel P凝膠可在該溶劑 內*溶脹。

Bio–Gel P–6DG凝膠的zui大分子量排阻為6,000，是專為脫鹽和緩沖液置換而設計。它可迅速獲得結果，且回收 率高、樣品稀釋度小。凝膠的疏水性確保與樣品分子間幾乎不發生交互作用。

更多信息，請索取資料# 2068。

Bio–Beads S–X 介質是中性、多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體，用于親脂性多聚物和有機洗脫溶質的分子量 排阻層析。分子量400–14,000 的排阻范圍，可用于分離分子量小的有機多聚物和其它疏水物質，如殺蟲劑、滅鼠 劑、多環芳香化合物和不飽和脂類。使用不同的洗脫劑會影響排阻極限。用Bio–Beads S–X 介質分離需要可流動的 洗脫劑，因此，該介質必須在層析柱內使用。洗脫溶劑的芳香性越強，排阻極限越高。介質可與苯、甲苯、二甲苯、 四氯化碳、二甲基甲酰胺、酮、芳香族類、二氯甲烷、o–二氯（代）苯、全氯乙烯、四氫呋喃和三氯（代） 苯等試劑兼容。

與交聯度相關的推薦流速：

• 1% 交聯度樹脂僅用于重力流層析
• 3% 交聯度樹脂可承受背壓20 bar 或300 psi，5 ml/in 的流速
• 8% 和12% 交聯度樹脂可承受多達33 bar 或500 psi 的背壓

預裝分子量排阻層析柱

為方便用戶，我們提供填裝Bio–Gel P–6 介質的預裝Econo–Pac 濾柱（1 ml 和5 ml）。由于Econo–Pac 濾柱無 需制備凝膠或裝柱，簡化了層析過程。濾柱可與BioLogic 系統、蠕動泵或任何層析系統配合使用，并可與注射器 連接進行簡單洗脫。

同時提供填裝有其它介質的Econo–Pac 濾柱；離子交換濾柱，羥基磷灰石濾柱，親和濾柱， 疏水作用濾柱。

Bio–Sil 和Bio–Silect 層析柱是以硅材料為基質，用 于樣品成分分離、脫鹽或緩沖液置換和分子量或分子 常數估算。

硅材料的分子量排阻層析柱應用于分離pH 2–8 的多肽、蛋 白和核酸。分析柱有不銹鋼（Bio–Sil）和生物兼容的PEEK塑料（Bio– Silect）兩種。Bio–Sil 和Bio–Silect SEC 柱填裝了5μm 親水結合相硅，蛋白 載量0.01–1.5 mg。為了分離洗脫峰較接近的蛋白，獲得更高的分辨率，可 串聯使用2 個300 mm SEC 柱、工作壓>1000 psi 的系列層析系統。

該層析柱確保在70°C 下的熱穩定性以及化學穩定性。介質在甲醇、 乙醇、氰化甲烷、DMSO 和THF 等有機溶劑中穩定。